一、無菌室

1.紫外線消毒

①在室溫20℃~25℃時(shí),220V 30W紫外燈下方垂直位置1.0m處的253.7mm紫外線輻射強(qiáng)度應(yīng)≥70uW/cm2,低于此值時(shí)應(yīng)更換。適當(dāng)數(shù)量的紫外燈,確保平均每立方米應(yīng)不少于1.5W。

②紫外線消毒時(shí),無菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥。

③在無人條件下,可采取紫外線消毒,作用時(shí)間應(yīng)≥30min。室內(nèi)溫度<20℃或>40℃、相對(duì)濕度大于60%時(shí),應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)照射時(shí)間。

④用紫外線消毒物品表面時(shí),應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射,且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量。

⑤人員在關(guān)閉紫外燈至少30min后方可入內(nèi)作業(yè)。

⑥按照GB15981的規(guī)定,評(píng)價(jià)紫外線的消毒與殺菌效果。

2.臭氧消毒

①封閉無菌室內(nèi),無人條件下,采用20mg/m3濃度的臭氧,作用時(shí)間應(yīng)≥30min。消毒后室內(nèi)臭氧濃度≤0.2mg/m3時(shí)方可入內(nèi)作業(yè)。

②按照GB/T18202的規(guī)定,檢測(cè)室內(nèi)臭氧的濃度。

3.無菌室空氣滅菌效果驗(yàn)證方法(沉降法)

①在消毒處理后與開展檢驗(yàn)活動(dòng)之前期間采樣。

②取樣位點(diǎn)的選擇應(yīng)基于人員流量情況和做試驗(yàn)的頻率。一般情況下,無菌室面積≤30m2時(shí),從所設(shè)定的一條對(duì)角線上選取3點(diǎn),即中心1點(diǎn)、兩端各距墻1m處各取1點(diǎn)；無菌室面積≥30m2時(shí),選取東、南、西、北、中5點(diǎn),其中東點(diǎn)、南點(diǎn)、西點(diǎn)、北點(diǎn)均距端1m。

③在所選位點(diǎn),將平板計(jì)數(shù)瓊脂平板(90mm)或水化3 M Petrifilm菌落總數(shù)測(cè)試片置于距地面80cm處,開蓋暴露15min,然后,置于36℃士1℃恒溫箱培養(yǎng)48h土1h。如果偵cha查某目標(biāo)細(xì)菌,則可用選擇性瓊脂平板(如PDA平板)或微生物測(cè)試片(如3 M Petrifilm環(huán)境李斯特氏菌測(cè)試片)。

④確認(rèn)平板上的菌落數(shù),如大于所設(shè)定的風(fēng)險(xiǎn)值,應(yīng)分析原因,并采取適當(dāng)措施。

二、培養(yǎng)基和試劑

1.培養(yǎng)基通常應(yīng)采用高壓濕熱滅菌法,121℃滅15min，特殊培養(yǎng)基按使用者的特殊要求進(jìn)行滅菌(如含糖培養(yǎng)基,115℃滅菌20min)。

2.部分培養(yǎng)基(如嗜鹽瓊脂培養(yǎng)基、膽硫乳培養(yǎng)基等),只能煮沸滅菌。

3.對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基或添加物質(zhì),應(yīng)采用膜過濾方法進(jìn)行過濾除菌。

4.即用型試劑不需滅菌,應(yīng)參見相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)或供應(yīng)商使用說明,直接使用。

三、器具和設(shè)備

1.濕熱滅菌:采用高壓滅器,121℃滅菌20min,適用于玻璃器皿、移液器吸頭、塑料瓶等,按照GB15981的規(guī)定,評(píng)價(jià)高壓滅菌器的殺菌效果。

2.干熱滅菌:采用干燥箱滅菌,160℃滅菌2h,180℃滅菌1h,適用于玻璃器皿,不銹鍋器具等。

3.液體消毒劑消毒:使用適當(dāng)濃度的自配或商業(yè)液體消毒劑(參見表D.1)對(duì)工作臺(tái)面、器具或設(shè)備表面進(jìn)行消毒。可按照GB15981的規(guī)定,評(píng)價(jià)自配或商業(yè)消毒劑的消毒效果可按照ISO18593,監(jiān)測(cè)工作臺(tái)面、器具或設(shè)備表面的消毒效果。

四、實(shí)驗(yàn)室廢棄物

1.對(duì)于培養(yǎng)物及其污染的物品(如斜面、api20E測(cè)試條、api20NE測(cè)試條、生物鑒定管、血清學(xué)鑒定用載玻片、mini- VIDAS測(cè)試條、用過的移液器吸頭、細(xì)菌培養(yǎng)平皿、注射器等),應(yīng)使用適當(dāng)濃度的自配或商業(yè)液體消毒劑(參見表D.1)對(duì)處理后一定時(shí)間,或121℃高壓滅菌至少30min,或者其他有效處理措施。將處理物倒入特殊標(biāo)識(shí)的垃圾袋內(nèi),直接送到指ding地點(diǎn)。

2.對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體及相關(guān)廢棄物,按照GB14925的規(guī)定進(jìn)行處理。

3.記錄并保留廢棄物和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體處理的記錄。