什么是磷酸化

磷酸化是將磷酸基團(tuán)加在中間代謝產(chǎn)物上或加在蛋白質(zhì)（protein）上的過(guò)程。其中除去磷酸基團(tuán)的酶稱為磷酸酶。 蛋白質(zhì)磷酸化可發(fā)生在許多種類的氨基酸（蛋白質(zhì)的主要單位）上，其中以絲氨/酸為多，接著是蘇氨/酸。

除了蛋白質(zhì)以外，部分核苷酸，如三磷酸腺苷（ATP）或三磷酸鳥苷（GTP）的形成，也是經(jīng)由二磷酸腺苷和二磷酸鳥苷的磷酸化而來(lái)，此過(guò)程稱為氧化磷酸化。另外在許多糖類的生化反應(yīng)中（如糖解作用），也有一些步驟存在氧化磷酸化作用。

信號(hào)傳導(dǎo)中的作用：

（1）細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)蛋白主要分為兩大類：一類在蛋白激酶的作用下磷酸化，共價(jià)結(jié)合ATP所提供的磷酸基團(tuán)；另一類則在信號(hào)作用下結(jié)合GTP，通常以GTP取代GDP。

（2）這兩種胞內(nèi)信號(hào)蛋白的共同特征是，在信號(hào)達(dá)到時(shí)通過(guò)獲得一個(gè)或幾個(gè)磷酸基團(tuán)而被激活，而在信號(hào)減弱時(shí)能去除這些基團(tuán)，從而失去活性。在信號(hào)中繼網(wǎng)中，某個(gè)信號(hào)蛋白磷酸化通常造成下游的蛋白依次發(fā)生磷酸化，形成磷酸化級(jí)聯(lián)反應(yīng)。

（3）蛋白質(zhì)的磷酸化主要集中在肽鏈中的酪氨/酸、絲氨/酸、蘇氨/酸殘基上，這些殘基上具有游離的羥基，且本身不帶電荷，當(dāng)磷酸化作用后，蛋白質(zhì)便具有了電荷，從而使結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，進(jìn)一步引起蛋白質(zhì)活性的變化，這也是蛋白質(zhì)磷酸化的意義所在。

磷酸化和非磷酸化的抗體主要區(qū)別有：

1.磷酸化抗體的檢測(cè)的是出于活性狀態(tài)（磷酸化）的蛋白。

2.磷酸化抗體只針對(duì)磷酸化位點(diǎn)設(shè)計(jì)，是一種位點(diǎn)特異性的多抗，這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達(dá)蛋白->純化->免疫動(dòng)物->收獲抗體。

4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點(diǎn)的多肽->人工體外磷酸化->鏈接半抗原->免疫動(dòng)物->收獲抗體。

5.磷酸化的蛋白很大部分是轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體。檢測(cè)同一個(gè)蛋白，原位檢測(cè)可能具有不同的細(xì)胞定位。轉(zhuǎn)錄因子磷酸化后由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核。

6.一般而言，磷酸化蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分子功能更直接相關(guān)。

非磷酸化抗體是測(cè)該蛋白的含量，不能知道其活性狀態(tài)，磷酸化抗體是測(cè)該蛋白的磷酸化水平如何，側(cè)重于了解該蛋白的一種活性狀態(tài)。

磷酸化抗體主要是針對(duì)磷酸化位點(diǎn)制備的,檢測(cè)該蛋白在細(xì)胞受到刺激時(shí)該蛋白的變化情況(磷酸化水平增強(qiáng)還是減弱)。

非磷酸化抗體(主要針對(duì)非磷酸化位點(diǎn)的肽段制備的)主要檢測(cè)組織或細(xì)胞中該蛋白的表達(dá)情況,組織分布或細(xì)胞中定位,同時(shí)可以作為磷酸化水平變化的內(nèi)參等.