無論是原代細胞還是細胞系或癌細胞，細胞長滿瓶后，需要對細胞進行傳代或?qū)⒓毎占饋碛米髌渌麑嶒?。貼壁生長的細胞必須要做的一步便是消化過程，下面便對細胞消化、中和、洗滌等過程做個簡單介紹。

1、絕大部分細胞消化的時候是只需用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留胰酶附著在細胞表面在37度一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，這樣連續(xù)傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。

2、什么算是消化好了呢？不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動，其實已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，就應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養(yǎng)的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性。細胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，這個時候即使是成片的，吹打不超過20次后（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個細胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間。

3、EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割細胞外基質(zhì)的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca2+，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話），而應該想其它辦法。

4、PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為Serum含有抑制trypsin的蛋白。對于一些難消化的細胞，可以配制不含Ca2+、Mg2+的PBS，因為這些離子也會抑制trypsin的活性。

5、胰酶的中和。細胞消化完之后，因為殘留的胰酶對細胞有傷害作用，需要將胰酶中和掉，就需要用到胰酶中和液。含有10%的胎牛血清作為胰酶抑制劑和細胞保護劑。